1. 二氧化碳培養(yǎng)箱的滅菌消毒方式
二氧化碳培養(yǎng)箱中的微生物往往會(huì)對培養(yǎng)的結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，常見的微生物處理方式包括物理過濾和滅菌，下面讓我們一起來探討兩種方式。
1.1 物理過濾
將箱體內(nèi)氣體通過過濾器循環(huán)，使箱體內(nèi)氣體潔凈度達(dá)到一定的級別(常見UPLA過濾器為1級、HEPA 過濾器為 100 級)；主要作用是保持箱體內(nèi)潔凈度，保證培養(yǎng)箱體內(nèi)的環(huán)境，但對微生物及病毒不起到任何的殺滅作用，僅僅是將箱體內(nèi)的微生物過濾到過濾器內(nèi)，這樣需要對過濾器進(jìn)行定期更換，采用物理過濾的培養(yǎng)箱更適合于環(huán)境條件較好的實(shí)驗(yàn)室。
1.2 滅菌
殺滅或清除傳播媒介上的所有微生物(包括芽胞)，使之達(dá)到無菌程度。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”，培養(yǎng)箱內(nèi)的無菌處理是指殺滅所謂微生物、病毒等，徹底避免環(huán)境對樣本的影響，以及消除不同樣本之間的交叉污染。根據(jù)不同的去除對象以及應(yīng)用環(huán)境需求，采用有效的方法。
1.2.1 微生物分類
根據(jù)微生物的抵抗能力不同，可將微生物分為如下幾類：
① 細(xì)菌繁殖體：易被一般的消毒劑殺滅，一般革蘭氏陽性細(xì)菌對消毒劑較敏感，采用化學(xué)消毒效果較為明顯；革藍(lán)氏陰性桿菌則常有較強(qiáng)的抵抗力，一般的化學(xué)消毒效果不明顯，但對熱敏感，采用熱力學(xué)方法效果明顯。
② 細(xì)菌芽孢和真菌芽孢：有厚厚的孢子壁，對化學(xué)消毒劑有較強(qiáng)的抵抗力，一般的化學(xué)消毒對芽孢效力有限；消毒能力強(qiáng)的化學(xué)試劑對芽孢有一定的殺滅作用，但對濃度、處理方法等要求嚴(yán)格；常見的方法是采用熱力學(xué)方法。
③ 病毒：種類較多，不同病毒種類對外界的抵抗能力不同，化學(xué)試劑消毒的效果也不相同，RNA活性受溫度影響明顯，一般采用熱力學(xué)方法去除。
④ 真菌：普遍對環(huán)境抵抗能力強(qiáng)，一般的紫外消毒方式和化學(xué)試劑消毒達(dá)不到預(yù)期的效果，通常采用熱力學(xué)方法處理，煮沸或使用高壓滅菌燈。
1.2.2 熱力學(xué)滅菌方法
培養(yǎng)箱內(nèi)常見的熱力學(xué)滅菌方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌。
①干熱滅菌：將箱體內(nèi)加熱到120℃以上，濕度為20% 以內(nèi)，持續(xù)一定的時(shí)間，通過高溫使蛋白質(zhì)及核酸變性失活，達(dá)到殺滅的目的。干熱140℃，2-4小時(shí)，是較為理想的滅菌方式，可以起到徹底滅菌的作用。。
②濕熱滅菌：濕熱滅菌指溫度超過100 ℃后水轉(zhuǎn)變?yōu)樗羝a(chǎn)生高壓強(qiáng)對微生物進(jìn)行高壓及穿透性導(dǎo)熱滅菌，通常使用120 ℃通過高壓滅菌器進(jìn)行滅菌才能達(dá)到效果。而培養(yǎng)箱無法承受高壓，所以使用90℃濕熱滅菌因溫度低于100 ℃而無法達(dá)到理想的濕熱滅菌效果。
由此可見，培養(yǎng)箱采用干熱高溫滅菌是目前一種可行且效果極佳的滅菌方法，能徹底消滅細(xì)菌、真菌、孢子、病毒等微生物且沒有二次污染。最好一個(gè)季度采用一次高溫滅菌，消除潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。
2. 二氧化碳培養(yǎng)箱的清潔維護(hù)
居安思危，防患于未然，是智者避免災(zāi)禍的良方，是降低損失的最佳措施。二氧化碳培養(yǎng)箱的日常維護(hù)就是良方，做好以下幾個(gè)方面可以大大降低污染的概率:
2.1 重視管理 安全為目的，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對實(shí)驗(yàn)環(huán)境的重要性。定期對系統(tǒng)進(jìn)行校正，至少每年一次。各項(xiàng)數(shù)值一旦固定后，不要隨意調(diào)節(jié)，以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動(dòng)，降低機(jī)器的靈敏度，同時(shí)還會(huì)影響培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)。
2.2 規(guī)范操作 必須穿著實(shí)驗(yàn)服，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)必須配帶一次性手套，特別是打開培養(yǎng)箱前，必須先用75%的酒精噴洗雙手，再取出培養(yǎng)箱中的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后，再放回培養(yǎng)箱時(shí)，同樣也要先噴酒精消毒。培養(yǎng)箱的兩個(gè)門開關(guān)?。ǚ牛┪镆杆?，否則會(huì)影響CO2的濃度、溫度和濕度，造成污染。切記開門時(shí)不要對著培養(yǎng)箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏。
2.3 清潔 去除灰塵、污垢和有機(jī)污漬。粉塵、污物以及有機(jī)物是微生物的棲身之所，并可能影響除污染劑（抗菌劑、化學(xué)殺菌劑以及消毒劑）的作用，必須先經(jīng)過清潔才能實(shí)現(xiàn)消毒和滅菌的目的。
2.4 消毒抑菌 醫(yī)用酒精可以很好地起到消毒作用，日常可使用75%的酒精對培養(yǎng)箱主體和內(nèi)部進(jìn)行擦拭，一個(gè)月一次即可。培養(yǎng)箱內(nèi)部可以放置2%~10%的硫酸銅溶液，硫酸銅溶液具有一定的殺菌抑菌效果。
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